反复冻融对生物试剂储存的影响？

反复冻融对生物试剂储存的影响？

反复冻融：活性生物试剂的 “隐形杀手”，不可逆损伤生物大分子

对于需冻存的试剂(-20℃/-80℃)，反复冻融的危害远大于单次短期超温，核心原因是冻融过程中形成的冰晶会破坏蛋白 / 酶的空间结构，同时加速氧化反应，且损伤具有累积性，每一次冻融都会导致活性不可逆下降。

核心规律：多数活性蛋白 / 酶类试剂，冻融 1 次活性下降 10%~30%，冻融≥3 次，活性损失>80%，即使仍在标称有效期内，也已丧失使用价值;

不同试剂的具体影响

生长因子 / 细胞因子（bFGF、IL-2）：冻融 1 次，ED50(半数有效浓度)显著升高，促细胞增殖能力大幅下降，冻融 3 次后基本无活性;

抗体（尤其是标记抗体）：冻融导致抗体分子聚团，特异性结合能力下降，背景染色升高，FITC 标记抗体冻融 2 次，荧光信号强度下降 50% 以上;

酶制剂（逆转录酶、DNA 连接酶）：冻融破坏酶的活性中心，比活性(U/μL)快速降低，冻融 1 次，酶活性下降 20%~25%;

普通冻存试剂（抗生素母液、引物原液）：虽对冻融敏感度较低，但冻融≥5 次也会导致成分降解，如引物冻融多次会出现引物二聚体，PCR 扩增效率下降。

关键对比：同样是 - 20℃储存，一次性冻存的生长因子有效期 3~6 个月，而反复冻融的生长因子有效期仅 1~2 周，差异达 10 倍以上。