​无菌与污染控制标准(核心安全指标)

无菌与污染控制标准(核心安全指标)

这是细胞培养液质量的基础要求，直接避免细胞培养过程中出现污染，导致实验失败。

1、细菌 / 真菌检测

检测方法：薄膜过滤法(澄清培养液)或直接接种法(含血清 / 蛋白的培养液);

判定标准：接种至胰酪大豆胨培养基(TSA/TSB，30-35℃培养 14 天)和沙氏葡萄糖培养基(SDA，20-25℃培养 14 天)，无浑浊、无菌落 / 菌丝生长为合格。

2、支原体检测（必检项）

检测方法：荧光定量 PCR 法(首选)、支原体培养法(药典标准);

判定标准：PCR 无特异性扩增条带，培养法无 “煎蛋状” 菌落，即为阴性。支原体污染会导致细胞增殖缓慢、形态异常，是细胞培养的 “隐形杀手”。

3、病毒检测（临床 / 生产用培养液必检）

检测对象：血清源培养液需检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛细小病毒等;人源细胞培养液需检测人源病毒(如腺病毒、乙肝病毒);

检测方法：细胞病变法(CPE)、ELISA 法、荧光定量 PCR 法;

判定标准：无细胞病变、病毒抗原 / 核酸检测阴性。

4、内毒素控制

判定标准：科研用培养液≤5 EU/mL;临床 / 生物药生产用培养液≤2 EU/mL(鲎试剂光度法定量检测);

意义：内毒素过高会引发细胞凋亡、炎症反应，影响细胞功能实验结果。