低渗环境(渗透压 < 细胞耐受下限)的挽救措施

低渗环境(渗透压 < 细胞耐受下限)的挽救措施

低渗多由培养液稀释过度、盐类添加不足或水分过多导致，挽救核心是 “提高溶质浓度”，同时避免细胞因渗透压骤升引发的脱水皱缩。

1. 核心方案：添加高渗母液(精准补充溶质)

选择与原培养液成分匹配的高渗母液，避免引入无关离子，常用母液类型及操作：

NaCl 母液（5M）：适用于因盐类不足导致的低渗，每 100 mL 低渗培养液中添加 0.1-0.3 mL 5M NaCl(可提高渗透压约 25-75 mOsm/kg)，具体用量根据实际检测结果调整;

葡萄糖母液（20%）：适用于因葡萄糖不足或水分过多导致的低渗，每 100 mL 低渗培养液中添加 1-2 mL 20% 葡萄糖(可提高渗透压约 10-20 mOsm/kg)，同时补充细胞能量来源;

操作步骤：

计算所需高渗母液体积(可通过渗透压仪检测结果反向推导);

在无菌超净台内，将高渗母液缓慢加入低渗培养液中，边加边轻轻搅拌(避免局部高渗导致细胞皱缩);

静置 10-15 分钟后检测渗透压，确保达到目标范围;

观察细胞状态，若细胞从膨胀恢复正常形态，说明调整有效。

2. 替代方案：添加等渗浓缩培养液

若没有高渗母液，可将原配方的基础培养液按 2 倍浓度配制(即浓缩培养液，渗透压约 560-640 mOsm/kg)，用于补充低渗培养液：

计算所需浓缩培养液体积(例如：100 mL 低渗培养液(渗透压 250 mOsm/kg)，加入 20 mL 浓缩培养液，可使总渗透压提升至约 300 mOsm/kg);

缓慢混合均匀后检测渗透压，该方法能同时补充营养成分和提高渗透压，适用于低渗程度较轻的情况。

3. 特殊场景：低渗导致细胞轻微膨胀但未裂解

若细胞已出现膨胀但未破裂，可通过 “逐步提高渗透压” 的方式挽救：

第一次调整仅将渗透压提升至目标范围的下限(如哺乳动物细胞先调整至 280 mOsm/kg)，培养 12 小时;

第二次调整至理想范围(如 290-310 mOsm/kg)，避免一次性骤升导致细胞脱水;

期间持续观察细胞形态，若出现皱缩，及时用少量低渗培养液回调。